Тест-системы производства ооо «нпо «диагностические системы. Что такое ИФА? Метод иммуноферментного анализа: суть, принцип, недостатки Что такое дс ифа вич аг ат

Владельцы патента RU 2515051:

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест-система включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Изобретение относится также к способу определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека путем исследования сыворотки крови больного при помощи описанной иммуноферментной тест-системы. Изобретение позволяет быстро и просто определять вероятные сроки заражения ВИЧ-инфекцией. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

ИЗОБРЕТЕНИЕ относится к области биотехнологии и медицины. И может быть использовано для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

Распространение ВИЧ-инфекции остается реальной проблемой современного мира. Поскольку своевременная и качественная диагностика является реальным средством для сокращения ареала распространения ВИЧ-инфекции, то разработка эффективной тест-системы, способной определить вероятный срок инфицирования, является важной задачей современного общества.

Анализ уровня техники показал существование ряда способов и тестов, предложенных разными авторами, для определения стадий ВИЧ-инфекции с использованием различных методов. Известен, например, молекулярно-генетический тест, основанный на определении вирусной нагрузки периферической крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Кравченко А.В., Серебровская Л.В., Голохвостова Е.Л. и др. Тимазид в сочетании с хивидом и инвиразой в комплесной терапии больных с ВИЧ-инфекцией. - Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1998. - №5 - с.51-52). Известен способ оценки стадий ВИЧ-инфекции (Клиническая иммунология и аллергология под ред. Г.Лолора-младшего. - М.: Практика, 2000. - С.585-587), заключающийся в определении уровня сывороточного β 2 -микроглобулина. Описан способ диагностики стадий ВИЧ-инфекции (В.В.Покровский с соавт. "Клиническая диагностика и лечение ВИЧ-инфекции". - М.: ГОУ ВУНМЦ РФ, 2001. - С.11), заключающийся в определении абсолютного количества CD4+лимфоцитов периферической крови. Также известен способ диагностики стадий ВИЧ-инфекции, основанный на том, что при исследовании сыворотки крови пациента методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяют оптическую плотность (ОП) исходного образца сыворотки крови, отражающую уровень ВИЧ-специфических антител, и ОП исходного образца сыворотки, инкубированного в течение 10 минут со 100 мкл 3.5 М раствора изотиоционата натрия. При снижении ОП на 40% и менее диагностируют стадию А - генерализованной лимфаденопатии, при снижении ОП в интервале 40-60% - стадию В - бациллярного ангиоматоза, орофарингеального кандидоза и т.д., а при снижении ОП на 60% и более - стадию С - СПИД (RU 2251701).

Таким образом, проведенный анализ уровня техники показал, что ни один из существующих источников не может служить ближайшим аналогом к заявляемому изобретению, так как все указанные документы относятся к способам и тестам, определяющим стадию ВИЧ-инфекции, и ни один из описанных источников не содержит технических решений, направленных на определение вероятного временного интервала заражения. Заявляемое изобретение относится к тест-системе, определяющей вероятный срок заражения ВИЧ-инфекцией. Анализ уровня техники не выявил аналогичных решений, направленных на решение поставленной задачи.

В настоящем изобретении заявляется набор реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест предназначен для дополнительного исследования ВИЧ-позитивных образцов с подтвержденным положительным результатом в иммунном блоте. Возможно исследование образцов с неопределенным или негативным результатом исследования в иммунном блоте, в которых подтверждено наличие ВИЧ РНК и/или антигена р24 ВИЧ-1.

В настоящем изобретении заявляется также способ использования данным набором реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

Техническим результатом заявленного изобретения является определение вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, простота выполнения теста, что позволяет использовать заявленное изобретение для эпидемиологического надзора за динамикой распространения ВИЧ-инфекции, за динамикой выявления сероконверторов в определенной популяции (поло-возрастные, социальные группы населения), а также при эпидемиологическом расследовании случаев и очагов ВИЧ-инфекции.

Сущность предлагаемого технического решения состоит в том, что определение вероятного срока заражения ВИЧ-1 проводят с помощью тест-системы, которая включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Исследуемые образцы тестируются нативными и разведенными в растворе для разведения образцов. По результатам тестирования образцы подразделяются на «ранние» и «поздние». «Ранние» образцы - вероятный срок инфицирования до 9 месяцев от момента заражения, «поздние» образцы - вероятный срок инфицирования 9 и более месяцев от момента заражения. Принадлежность образца к «ранним» или «поздним» оценивается по проценту падения оптической плотности (ОП) разведенного образца по отношению к неразведенному.

Данные примеры служат для иллюстрации конкретных воплощений изобретения и не направлены на сужение прав заявителя. Под объем прав заявителя подпадают все возможные варианты изобретения, в том числе и не приведенные в данном разделе.

В качестве иммуносорбента используются рекомбинантные антигены, содержащие иммунодоминантные регионы env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О. Конъюгат-1 - это смесь рекомбинантных антигенов gp41 ВИЧ-1 и gp41 ВИЧ-1 группы О, конъюгированных с биотином. На первом этапе исследуемые образцы, контрольные образцы и их разведения 1:101, а также РРС инкубируют с конъюгатом-1. Специфические антитела, присутствующие в исследуемых и контрольных положительных образцах, связываются с антигенами, сорбированными в лунках микропланшета, и антигенами, конъюгированными с биотином, и образуют устойчивые комплексы. Избыток образцов и конъюгата-1 удаляется при промывке. На следующем этапе в лунки добавляется стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (конъюгат-2). Конъюгат-2 связывается с комплексом антиген-антитело-антиген, присутствующим в лунке. Избыток конъюгата-2 удаляется промывкой, и затем в лунки добавляется хромоген/субстрат. В лунках со связавшимся конъюгатом-2 развивается голубое окрашивание, которое сменяется на желтое при добавлении стоп-раствора. Учет результатов проводится при помощи спектрофотометра.

В качестве иммуносорбента используются рекомбинантные антигены, содержащие иммунодоминантные регионы env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О. Используется один конъюгат - смесь рекомбинантных антигенов gp41 ВИЧ-1 и gp41 ВИЧ-1 группы О, конъюгированных с пероксидазой хрена. В процессе анализа образцы, контроли и их разведения, а также РРС инкубируют с конъюгатом в покрытых антигенами лунках планшета. Образующийся устойчивый комплекс после удаления избытка образца и конъюгата проявляется добавлением хромогена/субстрата. При этом развивается голубое окрашивание, которое сменяется на желтое при добавлении стоп-раствора. Учет результатов проводится при помощи спектрофотометра.

Принадлежность исследуемых образцов к «ранним» или «поздним» оценивается по % падения ОП при разведении образца, который рассчитывается по формуле:

%   п а д е н и е   О П = 100 % − О П   р а з в е д. о б р а з ц а − О П с р.   Р Р С О П   ц е л ь н о г о   о б р а з ц а × 100 % ,

где ОПср. РРС - среднее значение ОП РРС (рассчитывается по нескольким значениям ОП РРС).

Исследуемые образцы расценивать как «ранние»: если падение ОП>40%.

Исследуемые образцы расценивать как «поздние»: если падение ОП≤40%.

Пример расчета % падения ОП при разведении образца приведен в таблице 1.

Для учета и обработки результатов удобно использовать программу Excel. Использование данного приложения позволит проводить расчеты автоматически. Программа для обработки результатов тестирования находится на диске, приложенном к набору, или ее можно найти на сайте компании.

При разработке и оценке теста использовались образцы сероконверсионных панелей (BBI, Inc., Zeptometrix, США) и ВИЧ-позитивные образцы сывороток (плазмы) крови с установленными вероятными сроками заражения. Вероятность правильного определения давности заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, установленная по сероконверсионным панелям, составляет 100% (данные представлены в таблице 2), по образцам сывороток лиц с условно установленным сроком заражения (n=129) составляет 94% (таблицы 3, 4; данные приведены частично).

В тесте «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» оценивалась возможность исследования образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 различных субтипов, в том числе к ВИЧ-1 группы О: референс панель QCS 42-28-327-03Р (ГИСК) (субтипы А, В, С) (за исключением образца №24, содержащего антитела к ВИЧ-2), 1-ая международная референс панель анти ВИЧ (NIBSC Code:02/210) (субтипы А, В, С, Е) (за исключением образца №5, содержащего антитела к ВИЧ-2), образцы сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 группы О (№1342, К00175, К00259; BioMex). Результаты свидетельствуют о возможности исследования образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1, принадлежащих различным субтипам, в том числе к ВИЧ-1 группы О, в тесте «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК».

Специфичность набора реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» определяли при исследовании образцов сывороток донорской крови (n=352), продемонстрировавших в ИФА отрицательный результат. Специфичность составила 100%. Дополнительно были протестированы 255 образцов сывороток крови (отрицательных в ИФА):

■ 167 образцов сывороток крови от беременных женщин и больных с инфекционными заболеваниями;

■ 128 образцов сывороток крови от пациентов с различными неинфекционными заболеваниями.

Специфичность составила - 100%.

Полученные данные показывают высокую эффективность разработанной тест-системы «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» при определении вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

1. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека, характеризующаяся тем, что она включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты, представляющие собой конъюгаты, хромоген/субстрат.

2. Способ определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека, основанный на разном содержании антител в зависимости от срока инфицирования, включающий разделение исследуемого образца на две части и разведение одной из них; исследование обеих (нативной и разведенной) частей образца сыворотки крови больного при помощи иммуноферментной тест-системы, описанной в п.1; определение оптической плотности (ОП) нативного и разведенного образцов и РРС; расчет среднего значения ОП РРС; вычисление процента падения ОП разведенного образца по отношению к неразведенному по формуле
%   п а д е н и е   О П = 100 % − О П   р а з в е д. о б р а з ц а − О П с р.   Р Р С О П   ц е л ь н о г о   о б р а з ц а × 100 % ,
при этом вероятный срок заражения расценивается как «ранний», если падение ОП>40%, и как «поздний» - если падение ОП≤40%.

Похожие патенты:

Изобретение относится к компьютерному способу, использующему биохимические базы данных при разработке новых белковых соединений. Проектирование осуществляется оператором с помощью специально написанной программы PROTCOM на основе использования базы данных пентафрагментов белков.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления O-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложено моноклональное антитело и его антиген-связывающие части, которые специфически связывают C-концевую или центральную область фактора ингибирования миграции макрофагов (MIF).

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицинской диагностики. Предложен способ детекции белков в амилоидном состоянии, в котором получают образец лизата культуры дрожжей или ткани млекопитающего, добавляют к образцу ионный детергент, концентрируют белки в амилоидной форме на ацетатцеллюлозной мембране и детектируют их с использованием аптамеров, их конъюгатов или антител, специфичных к амилоидной форме белков.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммуноферментным анализам, и представляет собой способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для индивидуального подбора препаратов, содержащих пробиотические штаммы лактобактерий, для эффективной интравагинальной терапии.

Группа изобретений относится к составу реагента датчика-анализатора, адаптированного для содействия определению концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе, к способам определения концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе и к способу нанесения состава реагента датчика анализатора на подложку способом трафаретной печати.

Группа изобретений относится к ветеринарии и касается адъювантных композиций, содержащих комбинацию Quil A или его очищенной фракции, холестерина, диметилдиоктадециламмоний бромида (DDA), полиакриловой кислоты (CARBOPOL) и CpG и/или N-(2-дезокси-2-L-лейциламино-β-D-глюкопиранозил)-N-октадецилдодеканамида ацетата; способа приготовления таких адъювантных композиций и применению таких адъювантных композиций в иммуногенных и вакцинных композициях с различными антигенами.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ создания антитела и его функциональных фрагментов, направленных против опухолевого антигена, экспрессируемого на поверхности опухоли, устойчивой по меньшей мере к одному противоопухолевому соединению, основанный на применении для иммунизации измельченного гомогената, и/или суспензии, и/или клеточного лизата, происходящих из такой опухоли. Также рассмотрено применение способа по изобретению для получения моноклональных антител и их функциональных фрагментов, моноклональные антитела, полученные этим способом, кодирующие их нуклеиновые кислоты, экспрессирующий вектор, клетка-хозяин и способ получения антитела с их использованием, а также гибридомы, способные секретировать эти антитела, применение антител и их функциональных фрагментов для изготовления лекарства, противоопухолевая композиция и ее применение в качестве лекарства. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии резистентных опухолей. 16 н. и 26 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 пр., 6 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа, в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке крови человека. Тест-система включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа, раствор для разведения образцов и детектирующие реагенты. Изобретение относится также к способу определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа, в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке крови человека путем исследования сыворотки крови больного при помощи описанной иммуноферментной тест-системы. Изобретение позволяет быстро и просто определять вероятные сроки заражения ВИЧ-инфекцией. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

Для проведения комплексной оценки состояния организма применяется ИФА-метод проведения диагностики. Иммуноферментный анализ крови предназначен для диагностирования инфекционных, гематологических, первичных и вторичных иммунодефицитов.

Многие пациенты интересуются методом ИФА: что это, для чего проводится исследование. Иммуноферментный анализ начал использоваться сравнительно недавно. Изначально с его помощью изучались антигенные структуры, и он проводился только в научных целях. Затем ученые пришли к выводу, что при помощи ферментов можно выявить специфические антитела, возникающие в ответ на протекающее заболевание.

Изначально эта методика применялась только узкопрофильными медицинскими учреждениями, в основном на станциях переливания крови. Особое значение имеет метод ИФА для выявления ВИЧ-инфекции.

На сегодняшний день этот метод имеет широкую сферу применения. Современные лаборатории используют его для диагностирования:

• опухолей;
• гормональных нарушений;
• инфекций;
• хронических или перенесенных ранее инфекционных процессов;
• гельминтов.

Если в организме протекает инфекционный процесс, то этот вид диагностики считается наиболее оптимальным для определения типа заболевания.

Метод ИФА - что это, какова суть этого вида исследования? Этот и многие другие вопросы интересуют пациентов. Основой этого способа диагностики считается связывание иммунных клеток организма с антигенами возбудителей инфекции. Получившийся комплекс определяют при помощи специального фермента.

Чтобы понять принцип метода ИФА, нужно знать, как проходит реакция антиген-антитело. Антиген - чужеродная для организма молекула белкового происхождения, которая проникает вместе с инфекцией. Частички чужой крови, несовпадающие по группе, также считаются антигенами. В организме они провоцируют иммунную реакцию, направленную на защиту от чужеродных веществ. Поэтому тело человека вырабатывает антитела - иммуноглобулины, способные присоединяться к антигенам, образуя иммунный комплекс. Такие соединения намного легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Реакцию на наличие таких иммунных комплексов проводят в лабораторных условиях, применяя уже готовые соединения, чтобы определить, есть ли в крови подобные им.

Суть метода ИФА достаточно простая, однако из-за того, что анализ крови проводится для выявления многих инфекций и болезней, существует несколько его разновидностей. Каждый отличается схемой проведения и областью применения. Может быть прямой или непрямой ИФА. Прямой метод подразумевает под собой то, что применяются обездвиженные антитела, реагирующие с антигенами. Основным плюсом такого метода является то, что все процессы можно автоматизировать, а значит, диагностика занимает немного времени.

Непрямой метод подразумевает, что применяются антитела вторичного характера. А на твердой фазе обездвиживается антиген. Анализ позволяет определить антитела к различным антигенам. Это помогает достигнуть более точного результата, однако метод отличается сложностью.

Методом ИФА имеют множество преимуществ в сравнении с другими способами диагностики. К основным можно отнести такие:

• высокая чувствительность;
• стабильность при хранении ингредиентов;
• скорость проведения диагностики;
• можно применять небольшое количество исследуемого материала;
• есть возможность автоматизации всех процессов;
• можно выявить инфекцию на самых ранних стадиях.

Этот метод диагностики универсальный, поэтому подходит для проведения массового обследования. При помощи анализа есть возможность проследить динамику протекания инфекционного процесса.

Проведение исследования при помощи метода ИФА могут назначить при подозрении на множество болезней:

На наличие антител исследуется венозная кровь. Перед проведением анализа из нее выделяют элементы, которые могут осложнять исследование. Может проводиться забор и других биологических жидкостей.

Чтобы получить наиболее точную информацию, забор крови проводится на голодный желудок. Если процедура была назначена для определения скрытой инфекции, то за несколько недель до проведения анализа нужно прекратить принимать антибактериальные и противовирусные препараты. В зависимости от оснащенности лаборатории, где проводился забор материала, результат можно получить в течение суток. В экстренных случаях это время сокращается до нескольких часов.

Использование метода ИФА помогает определить наличие многих инфекций в организме, в частности и сифилиса. Для проведения исследования берется кровь из вены натощак. Затем осуществляется исследование, помогающее определить не только наличие болезни в организме, но и точные сроки ее начала, так как в течение болезни одни антитела заменяются другими в строго определенном порядке.

При острой фазе, свидетельствующей о продолжительном течении болезни, или при обострении хронической инфекции в крови будут обнаружены иммуноглобулины типа M. Наличие иммуноглобулинов типа A свидетельствует о том, что инфекция обитает в организме более 4 недель. Иммуноглобулины группы G говорят о разгаре болезни или о ранее проведенной терапии.

По степени окраса лунок оценивают интенсивность протекания инфекционного процесса, так как его насыщенность зависит от количества образовавшихся иммунных комплексов.

ИФА-метод применяется и для проведения анализа на в таком случае имеет определенные особенности, которые связаны с протеканием и прогрессированием болезни. Этот метод исследования считается наиболее приемлемым для определения, однако проводить его нужно не ранее чем через месяц после воздействия факторов риска. Это связано с наличием инкубационного периода, протекающего от 45 дней и до 6 месяцев. Именно поэтому анализ нужно повторить через полгода.

• аскаридоз;
• лямблиоз;
• токсоплазмоз и др.

Несмотря на все преимущества, существуют также недостатки метода ИФА. Основным недостатком считается то, что при проведении исследования доктор должен заранее иметь предположение о заболевании.

При нет возможности случайно найти возбудителя и определить его иммуноферментные свойства. Тест только указывает на наличие антител в крови больного. Кроме того, это достаточно дорогостоящий анализ.

Результатом качественного ИФА будет либо наличие антител, либо их отсутствие в крови. Если проводится количественный анализ, то концентрация антител может выражаться или в цифровом значении, или в определенным количеством знаков +.

Кроме того, анализируются такие показатели, как:

Показатель IgM указывает на протекание острого инфекционного процесса в организме. Полное его отсутствие может говорить об отсутствии возбудителя болезни или переходе ее в хроническую стадию.

Показатель IgA при отрицательном результате теста на IgM говорит о хронической или скрытой инфекции. Одновременное присутствие IgM и IgA свидетельствует о том, что болезнь находится в острой стадии. Наличие IgG говорит о переходе болезни в хроническую стадию или о полном выздоровлении и выработке иммунитета.

Сейчас существуют специальные тесты ИФА, которые можно провести самостоятельно.

ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма.

В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических (АТ) и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело» , который выявляют при помощи фермента. Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию. И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике!

Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях. Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него.

Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины. Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое. Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.

Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.

Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:

• Гормональный статус (гормоны щитовидной железы и надпочечников, половые гормоны);
• Присутствие вирусной и бактериальной инфекции (ВИЧ, В и С, хламидиоз, сифилис, и , и , а также многие другие болезни, вызванные патогенными микроорганизмами);
• Следы жизнедеятельности микроорганизмов, возбудивших инфекционный процесс, который благополучно закончился и перешел в стадию формирования иммунного ответа на этот возбудитель. Такие следы, то есть, антитела, во многих случаях остаются циркулировать в крови пожизненно, чем защищают человека от повторного заражения.

Иммуноферментный метод, позволяет определить не только присутствие самого возбудителя (качественный анализ), но и его количественное содержание в сыворотке крови больного.

Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки. Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами. Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд. На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм , а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела.

Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

• IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
• IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
• IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования. Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой. Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

Анализ на , пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

Иммуноферментный метод, применяемый для диагностики ВИЧ инфекции, относится к первостепенным стандартным исследованиям, которые, однако, требуют особых условий, поскольку тема очень деликатная.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций , предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий.

При внедрении тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:

• IgM могут обнаружиться уже дней через семь после заражения;
• IgA говорят о том, что инфекция в организме живет уже более месяца;
• IgG подтверждают диагноз хламидиоза, помогает следить за лечением и определить его действенность. Следует заметить, что антитела класса G остаются и циркулируют в организме независимо от давности болезни, поэтому для правильной расшифровки анализа нужно принимать во внимание референтные значения (нормы), которые, кстати, для каждой КДЛ свои: с учетом марки тест-системы и специфичности реагентов, входящих в набор. Значения нормы вписываются в бланк рядом с результатом ИФА.

Что касается , то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода.

Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс – не дает. Между тем, определение нормы титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G. Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ). На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител.

О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата.

Цена: по запросу

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Диагностические системы

Страна: Россия

Ед. изм.: набор

Вид упаковки: картонная коробка

Артикул: L-1823

Описание

Тест-система иммуноферментная для выявления антител классов G, M и А к Treponema pallidum (T. pallidum) в сыворотке (плазме) крови и ликворе человека с целью диагностики сифилиса, полный набор реагентов на 96х2 определения, подходит для ручных методик и постановки на автоматических анализаторах. В основе метода лежит принцип "ловушки", заключающийся в том, что специфические антитрепонемные антитела всех классов, присутствующие в образце, связываются одновременно с рекомбинантными антигенами - аналогами иммунодоминантных белков T.pallidum, зафиксированными в лунках планшета, и с теми же антигенами, меченными пероксидазой хрена, при совместной инкубации образцов сыворотки (плазмы) крови или ликворе человека и конъюгата. Изменение цвета субстратно-хромогенной смеси, содержащей ТМБ, при внесении ее в лунки планшета указывает на наличие в исследуемых образцах специфических антител к бледной трепонеме

Выявление антител к Treponema pallidum играет важную роль при диагностике сифилиса, поскольку T.pallidum не может быть выделена из культуры клеток, а пробы для прямого определения возбудителя зачастую недоступны при латентных и поздних стадиях заболевания. В серодиагностике сифилиса используются используются нетрепонемные (РМП, RPR, VDRL) и трепонемные (РПГА, РИФ, ИФА) тесты. Иммуноферментные тесты для определения суммарных антител используются для массового скрининга донорской крови и для постановки диагноза сифилиса как составляющая часть комплекса серологических реакций. После успешно проведенной терапии реактивность трепонемных тестов в большинстве случаев сохраняется

Состав набора:
1. Планшет полистироловый 96-луночный разборный - 2 шт.,
2. Конъюгат - прозрачная желтая жидкость,
3. Контроль положительный - прозрачная красная жидкость,
4. Контроль отрицательный - прозрачная зеленая жидкость,
5. Промывочный раствор, концентрат, рН от 6,9 до 7,6,
6. ТМБ - прозрачная бесцветная жидкость,
7. Раствор субстрата - прозрачная бесцветная жидкость, pH ~4,2.
8. Стоп-реагент (0,2М),
9. Инструкция по применению и паспорт качества.
Условия хранения: при температуре +2...8°C, замораживание недопустимо.
Срок годности - 15 месяцев с даты производства, указанной на этикетке набора.
Соответствие требованиям ТУ 9398-182-05941003-2010.
Зарегистрировано в Росздравнадзор.